Nhuộm hóa mô miễn dịch là gì? Các bước thực hiện nhuộm hóa mô miễn dịch và kết quả

Nhuộm hóa mô miễn dịch (IHC) là một quá trình nhuộm màu đặc biệt được thực hiện trên mô ung thư vú tươi hoặc đông lạnh được loại bỏ trong quá trình sinh thiết. IHC được sử dụng để cho biết liệu các tế bào ung thư có thụ thể HER2 hoặc thụ thể hormone trên bề mặt của chúng hay không. Đây là một thông tin đóng vai trò quan trọng trong việc lập kế hoạch điều trị. Tất cả thông tin về IHC và nhuộm hóa mô miễn dịch sẽ được chúng tôi giới thiệu đến bạn ngay dưới đây. 

Nhuộm hóa mô miễn dịch là gì?

nhuộm hóa mô miễn dịch

Hóa mô miễn dịch (Tên tiếng anh Immunohistochemistry – IHC) là ứng dụng phổ biến nhất của phương pháp nhuộm miễn dịch. Nó liên quan đến quá trình xác định có chọn lọc các kháng nguyên là protein trong các tế bào của một phần mô bằng cách khai thác nguyên tắc kháng thể liên kết đặc biệt với các kháng nguyên trong các mô sinh học.

Lợi ích chính của việc duy trì miễn dịch trong hóa mô miễn dịch là khả năng nhìn thấy mục tiêu mong muốn trong một mẫu mô khi vẫn duy trì bối cảnh không gian và kiến trúc mô. 

Kỹ thuật nhuộm hóa mô miễn dịch rất hữu ích để phát hiện và định lượng các epitopes. Nhuộm hóa mô miễn dịch là một kỹ thuật dùng để xác định kháng nguyên tế bào hoặc mô bằng các tương tác kháng nguyên – kháng thể. IHC là cái tên có nguồn gốc từ sự tăng cường hệ miễn dịch, có liên quan đến các kháng thể được sử dụng trong quy trình (histo – tiền tố chỉ mô học) nhuộm hóa mô miễn dịch. 

Vị trí liên kết kháng thể được xác định bằng cách ghi nhãn trực tiếp kháng thể hoặc bằng cách sử dụng phương pháp ghi nhãn thứ cấp. 

Thông thường để hình dung mục tiêu quan tâm cần dựa trên mức độ biểu hiện kháng nguyên và khả năng tiếp cận bởi một liên hợp trực tiếp là chưa đủ để hình dung. Trong các trường hợp, việc ghi nhãn gián tiếp được dùng bằng cách sử dụng một loại kháng thể thứ cấp. Phương pháp được ưu tiên sử dụng ở hiện tại CST là sử dụng các thuốc thử phát hiện dựa trên polymer,  một bước có độ nhạy cao dành riêng cho IgG thỏ hoặc chuột. 

Nhuộm hóa mô miễn dịch (IHC) được thực hiện như thế nào?

các bước nhuộm hóa mô miễn dịch

Chuẩn bị mô

Các quy trình thu thập, bảo quản và cố định mô khác nhau tùy thuộc vào mẫu và mục tiêu quan tâm. Việc thu thập và cố định mô gây ảnh hưởng trực tiếp đến tính toàn vẹn của mẫu và kết quả thí nghiệm của bệnh nhân.

Các chất cố định liên kết ngang như formalin thường được sử dụng để chuẩn bị các chất cho nhuộm hóa mô miễn dịch vì chúng bào tồn tính toàn vẹn cấu trúc của mô, đồng thời giúp mô duy trì cấu trúc. Một cách khác là bảo quản lạnh bằng cách đóng băng các mẫu của bạn. Đây được coi là một lựa chọn tốt nến bạn đang cố gắng phát hiện mục tiêu được phosphoryl hóa.  

Truy xuất kháng nguyên

Fixatives được sử dụng để bảo toàn tính toàn vẹn cấu trúc mẫu mô có nhược điểm ở chỗ chúng có thể chôn epitope kháng thể được thiết kế để nhận ra biểu tượng kháng thể của bạn. 

Một số phương pháp tồn tại để lộ các epitopes đã được cất giấu bằng cách cố định. Chúng bao gồm truy xuất kháng nguyên do phân giải protein, dựa vào một loại enzyme như proteinase K hoặc truy xuất epitope do nhiệt.

Sử dụng nhiệt để phá vỡ các liên kết chéo và tháo gỡ protein. Cả hai phương pháp đều có thể để lộ các epitopes khiến chúng tiếp cận với kháng thể chính và chấp nhận nhuộm màu bằng hóa mô miễn dịch.

Phương pháp truy xuất kháng nguyên phổ biến nhất được sử dụng là HIER. Tuy nhiên vẫn có thể thử nghiệm nhiều phương pháp truy xuất kháng nguyên để xác định các điều kiện tối ưu để sử dụng từng kháng thể trong hóa mô miễn dịch. 

Liên kết kháng thể

Việc lựa chọn kháng thể phù hợp là một trong những bước quan trọng nhất để cho ra kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch tốt nhất. Tất cả các kháng thể được hóa mô miễn dịch được các minh không chỉ có tín hiệu mạnh trong mô mà còn trải qua một quy trình xác nhận nghiêm ngặt để xác nhận tính đặc hiệu của tín hiệu.

Các nhà khoa học chuyên về IHC đã thử nghiệm một số lượng lớn các kháng thể và đề xuất những kháng thể phù hợp nhất cho ứng dụng.

Hệ thống Phát hiện

Nhuộm hóa mô miễn dịch cho phép 2 lớp phát hiện rộng:

  • Nhiễm sắc thể 
  • Huỳnh quang

Để phát hiện nhiễm sắc thể, nên sử dụng các hệ thống dựa trên polymer để tránh các hạn chế của hệ thống dựa trên biotin và tăng độ nhạy của xét nghiệm.

Phát hiện dựa trên polymer nhạy hơn các hệ thống dựa trên biotin. Việc phân tích biểu mô phổi người nháng parafin và phát hiện dựa trên biotin hoặc phát hiện dựa trên polymer. Phát hiện dựa trên polymer mang lại độ nhạy nâng cao và dẫn đến nhuộm màu mạnh hơn. 

Kết quả nhuộm hóa mô miễn dịch cho bạn biết điều gì?

Các kiểu nhuộm trên hóa mô nhiễm sắc thể

Trường hợp dùng IHC để kiểm tra HER2

Nhuộm hóa mô miễn dịch là xét nghiệm được sử dụng phổ biến nhất để xem liệu một khối u có quá nhiều thụ thể HER2 trên bề mặt tế bào ung thư hay không. Nếu có quá nhiều thụ thể HER2 thì các tế bào sẽ nhận được quá nhiều tín hiệu yêu cầu nó phát triển và phân chia liên tục. 

Xét nghiệm nhuộm hóa mô miễn dịch cho điểm từ 0 đến 3+ để đo lượng protein thụ thể HER2 trên bề mặt tế bào trong mẫu mô ung thư vú. Nếu điểm là từ 0 đến 1+ thì nó được gọi là HER2 âm, còn nếu điểm là 2+ thì nó được gọi là đường biên giới. Khi điểm là 3+ thì được gọi HER2 dương tính. 

Một số lượng lớn các bệnh nhân ung thư vú được coi là âm tính với HER2 cs một số protein HER2 trên bề mặt tế bào của nó. Chỉ là số lượng protein HER2 không có đủ để ung thư được coi là dương tính với HER2. Hiện nay các bác sĩ coi những bệnh nhân ung thư này là HER2 thấp.

Ung thư vú HER2 thấp có điểm 1+ trong xét nghiệm nhuộm hóa mô miễn dịch hoặc điểm 2+ trong xét nghiệm với xét nghiệm FISH âm tính. 

Kết quả xét nghiệm IHC đáng tin cậy nhất đối với các mẫu mô tươi hoặc đông lạnh. Nhuộm hóa mô miễn dịch có xu hướng là một xét nghiệm không đáng tin cậy đối với các mô được bảo quản trong sắp hoặc trong các hóa chất khác.

IHC để kiểm tra thụ thể hormone

Hầu hết các phòng thí nghiệm thử nghiệm đều sử dụng xét nghiệm IHC để xem liệu các thụ thể hormone có trên các tế bào ung thư vú hay không. Nếu có các thụ thể hormone thì đồng nghĩa là sự phát triển của các tế bào ung thư được thúc đẩy bởi các hormone estrogen hoặc progesterone. 

Không phải tất cả các phòng thí nghiệm đều sử dụng cùng một phương pháp để phân tích kết quả thử nghiệm, họ không phải báo cáo kết quả theo cùng một cách giống nhau. Vậy nên bận có thể thấy bất kỳ kết quả nào được liệt kê dưới đây: 

  • Một tỷ lệ phần trăm cho bạn biết có bao nhiêu tế bào trong số 100 vết bẩn dương tính với các thụ thể hormone. Bạn sẽ thấy một số từ 0% (không ai có thụ thể) đến 100% (tất cả đều có thụ thể).
  • Một số từ 0 đến 3. Trong đó 0 là không có thụ thể nào có mặt, 1 là một số nhỏ hiện diện, 2 là một số trung bình và 3 là một số lượng lớn.
  • Điểm Allred từ 0 đến 8. Hệ thống tính điểm này được đặt theo tên của bác sĩ đã phát triển nó. Hệ thống này để xem xét tỷ lệ phần trăm các tế bào có kết quả xét nghiệm dương tính với các thụ thể hormone, cũng như mức độ hiển thị của các thụ thể sau khi nhuộm, gọi là cường độ. Thông tin này được kết hợp để đưa ra các điểm từ 0 đến 8. Nếu điểm càng cao thì càng tìm thấy nhiều thụ thể và chúng càng dễ nhìn thấy trong mẫu.
  • Có thể thấy kết quả là từ “tích cực” hoặc “tiêu cực”.

Xét nghiệm nên được thực hiện cho cả thụ thể estrogen và thụ thể progesterone.

Nếu kết quả được báo cáo chỉ là từ tích cực hoặc tiêu cực cần hỏi bác sĩ để biết được tỷ lệ phần trăm và xếp hạng hoặc con số rõ ràng. Các phòng thí nghiệm khác nhau có các điểm giới hạn khác nhau để gọi ung thư là dương tính với hormone – thụ thể hoặc âm tính với hormone – thụ thể. 

Ví dụ nếu dưới 10% tế bào được xét nghiệm nhuộm màu dương tính (ít hơn 1 trong 10) có thể gọi đây là kết quả âm tính. Tuy nhiên kết quả này cũng có thể coi là dương tính ở các phòng thí nghiệm khác dù kết quả xét nghiệm thấp.

Các nghiên cứu chỉ ra rằng bất kỳ kết quả tích cực nào, dù thấp đến đâu cũng đều cho thấy rằng liệu pháp nội tiết tố có thể giúp điều trị ung thư. Điểm 0 là cần thiết để loại trừ hoàn toàn liệu pháp nội tiết tố như một lựa chọn để điều trị.

Đôi khi một báo cáo từ một phòng thí nghiệm nói rằng tình trạng hormone vẫn chưa được biết, điều này có nghĩa là:

  • Thử nghiệm không bao giờ được thực hiện.
  • Mẫu mô mà phòng thí nghiệm nhận được quá nhỏ để có được kết quả đáng tin cậy.
  • Rất ít thụ thể estrogen và progesterone có mặt.
  • Nếu không có thụ thể hormone hiện diện hoặc chúng không thể đo lường và nhìn thấy thì ung thư được gọi là âm tính với thụ thể hormone.

Bạn cần nói chuyện với bác sĩ để đảm bảo bạn sẽ được xét nghiệm bởi một phòng thí nghiệm có nhiều kinh nghiệm trong xét nghiệm nhuộm hóa mô miễn dịch cho các thụ thể hormone. Phòng thí nghiệm thực hiện càng nhiều xét nghiệm sẽ cho kết quả xét nghiệm của bạn càng có khả năng chính xác cao hơn. Nếu bạn nhận được kết quả âm tính hãy hỏi họ đầy đủ lý do tại sao được coi là âm tính với thụ thể hormone hoặc yêu cầu làm lại bài kiểm tra.

Liên hệ ngay Hotline CHEK Genomis để làm xét nghiệm gen và tư vấn di truyền với các dịch vụ nổi bật như: Tầm soát ung thư di truyền, xét nghiệm ung thư giai đoạn muộn, xét nghiệm sinh thiết lỏng Guardant 360, xét nghiệm sàng lọc trước sinh,…

hotline 091 176 3082 checkco.com

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *